طرق تحضير بعض الصبغات واستعمالاتها

1 ـ صبغة بوراكس ـ كارمين  Carmine – Borax  :

          من الصبغات المفردة Single stains أو الصبغات المتعادلة Neutral stain التي تستخدم بصورة عامة لصبغ المقاطع وكذلك النماذج الكاملة الصغيرة الحيوانية أو النباتية مثل جنين الدجاج Chick embryo والعضلات Muscles ولطحالب Fucus .      

          4 جرام من مسحوق البوركس .

          3 جرام من صبغة الكارمين .

          100 سم/مكعب ماء مقطر ، يُسخن المزيج .

          100 سم/مكعب كحول 70% ويُترك لمدة يومين ثم يرشح المحلول .

2 ـ هيما توكسلين ديلافيلد  Delafield`s Haematoxylin:

          صبغة قاعـدية ، تستخدم في صبغ النوة و والكروماتين و ألياف المغزل والحيوانـات البدائية ( الأوليات ) والصفائح المنخلية النباتية والخصي والحبل الشوكي والغدد الدرقية .

طريقة تحضير الصبغة :

1 ـ 400سم / مكعب من محلول مشبع من شب الأمونيا .

2 ـ 25سم / مكعب مـن 16%  هيماتوكسلين في كحول مطلق ، حيـث يوضع في دورق مغلق   

       بالقطن ثم يعرض لأشعة الشمس لمدة 4 أيام ثم يرشح ، يؤخذ الراشح ويضاف له :

              أ ) 100سم/ مكعب من الجليسرين .

           ب ) 100 سم/ مكعب كحول مطلق ( 100 % ) .

          نضع المزيج في زجاجة شفافة حيث توضع في مكان دافئ ومضاء لمدة 6أسابيع لكي تنضج ولتعجيل نضوج الصبغة نضيف مركب فوق أكسيد الهيدروجين .ويمكن حفظ الصبغة لسنين عديدة في أوعية زجاجية محكمة الغلق ( ملحوظة : يجب ترشيح   الصبغة قبل كل إستعمال ) .

3 ـ هيماتوكسلين إرليك  Ehrlich’s  haematoxylin :

          صبغة قاعدية وتستخدم بصورة عامة لجميع الأنسجة الحيوانية وخاصة عند إستخدام الأيوسين كصبغة مضادة حيث تصبغ الكلية والكبد والخصي .

تحضير الصبغة :

          1 ـ 2 جم من الهيماتوكسيلين .

          2 ـ 100 سم / مكعب كحول مطلق ثم يضاف عليه :

             أ ـ 100سم م مكعب جليسرين .

          ب ـ 10سم / مكعب حامض الخليك الثلجي . ثم تضاف كمية من شب البوتاسيوم .

          تترك الصبغة في قارورة زجاجية معرضة لضوء الشمس ، وتفتح القنينة لفترة قصيرة ثم تغلق وترج .تعاد هذه العملية لعدة أسابيع إلى أن يتم نضج الصبغة ، ويمكن إنضاج الصبغة آنيـا بإضافة 24, 0 جـرام أيودات الصوديوم  Sodium Iodate .

4 ـ الأيوسـين Yالمصفـرة Eosin Y yellowish :

          صبغة حامضية تستعمل بصورة عامة لصبغ السيتوبلازم الخاص بالخلايا الحيوانية ، وكذلك في الأنسجة النباتية .

طريقة التحضير :

          واحد جرام من الصبغة تذاب في 99% كحول تركيز 75% أو 95% أو بإذابة : واحد جرام من الصبغة في 99سم/مكعب من الماء المقطر .

5 ـ السفرانين O ( Safranin  O  ) :

          صبغة قاعدية مهمة جدا وخصوصا بالنسبة للأنسجة النباتية حيث تصبغ جميع الأجزاء الملجنة والمسوبرة ( بالسيوبرين ) والكروموزومات والنواة والأجسام المركزية  والفطريات والصفائح المنخلية والأوعية الخشبية وكذلك تصبغ الأنسجة الحيوانية حيث تصبغ الألياف المرنة والحيوانات وحيدة الخلية والخلايا القطنية .

طريقة تحضير الصبغة :

          تحضر بإذابة واحد جرام من الصبغة في 100سم/ مكعب من الكحول المطلق ، ثم يخفف المحلول بالماء المقطر بنسبة 1 : 1 قبل إستعمالها للصبغ ، في عملية الصبغ يعتمد زمن الصبغ على طبيعة العينة بحيث يستغرق الزمن من 2 إلــى 24 ساعة .

6 ـ أزرق الميثلين Methylene blue  :

          من الصبغات القاعدية والمستخدمة بصورة خاصة في صبغ البكتريا والخمائر كثيرا ما تستعمل للنماذج الحيوانية وقليلا للنماذج النباتية حيث تصبغ الدم والأنسجة الطلائية والأنسجة العصبية والإبتدائيات :

تحضير الصبغة في حالة إستخدامها كصبغة عادية :

          1 ـ يذاب 1جم من مسحوق الصبغة في 100سم/مكعب كحول تركيزه 95% .

          2 ـ يضـاف 100سم/مكعب ماء مقطر.

تحضير الصبغة في حالة إستخدامها كصبغة حيوية :

          يذاب 1جم من مسحوق الصبغة مع 6, 0 جم كلوريد الصوديوم في 100سم/مكعب ماء مقطر ثم تترك العينة في الصبغة لمدة 10 ـ 15 دقيقة .