طرق مشاهدة العوامل الوراثية

لكي نشاهد العوامل الوراثية في الخلية لابد من مشاهدة الخلية في وضع الإنقسام الغير مباشر ، عليه سوف نتعلم طريقة تحضير القمة النامية لجذر نبات لمشاهدة مراحل الإنقسام الغير مباشر الكروموسومات نظرا للنمو المستمر في جذر النبات وخاصة قمة الجذر .

          لنستخدم القمة النامية لجذر البصل لدراسة الإنقسام الميتوزي ( الخيطي أو الفتيلي ) وتتم العملية كالتالي :

1 ـ يقطع الجزء القمي لجذر البصل ويوضع في زجاجة ساعة ثم يضاف عليه مزيج من الكحول 70% وحامض الخليك بنسبة 3 : 1 ولمدة 10 ـ 15 دقيقة .

2 ـ ينقل هذا الجزء إلى زجاجة ساعة أخرى ويضاف عليه مزيج حامض الهيدروكلوريك  وكحول 70% بنسبة 1 : 4 ولمدة 5 ـ 10 دقائق .

3 ـ ينقل هذا الجزء بعد إنتهاء المدة الذكورة إلى زجاجة ساعة فيها مزيج من الكحول 70% وحامـض الخليك مرة أخرى لإزالة أثر حامض الهيدروكلوريك ثم يغسل بالماء .

4 ـ ينقل جزء الجذر بانتباه وبهدوء إلى شريحة زجاجية نظيفة بعد صنع فلـم رقيق عليها من زلال البيـض ( Albumen ) ثم يهرس الجزء القمي للجذر إما بالطريقة السابق ذكرها أو بواسطة نهاية مقبض الإبرة الحديدي المستعمل في المختبر بحيث تتفرق الخلايا .

5 ـ يوضع المثبت شادن Shaudin`s Fluid فوق الهريس قبل أن تجف تماما لمدة 10ـ 15 دقيقة ( يحضر هذا المثبت من محلول 66سم /مكعب من محلول كلوريد الزئبقيك المائي المشبع و33سم/مكعب من 95% كحول إثيلي و5ـ10سم/ مكعب من حامض الخليك الثلجي ) .

6 ـ تغسل الشريحة الزجاجية بالماء لمدة 3 دقائق .

7 ـ يغمر الهريس بصبغة هيماتوكسلين هارس لمدة دقيقتين ثم تغسل الشريحة بالماء المقطر ثم ب 30% ، 70% ، 90% كحول ثم بالكحول المطلق لمدة 3 دقائق في كل مرة .

8 ـ تغمر الشريحة بالزايلين مرتين لمدة دقيقة واحدة في كل مرة ثم تحمل الشريحة ببلسم كندا ثم يوضع الغطاء الزجاج .

طريقة تحضير صبغة هيماتوكسيلين هارس Harris haematoxylin

          هذه الصبغة نووية قوية تستعمل كثيرا لصبغ الكروماتين الجنسي Chromatin Sex وتستغرق فترة الصبغ  من  2 ـ 5 دقائق وتحضر بالطريقة التالية :

ـ 1 جم من مسحوق الصبغة .

ـ 10سم/مكعب كحول مطلق .

ـ 20 جم شب الأمونيا أو البوتاس .

ـ 200سم / مكعب ماء مقطر .

ـ  0.5 أوكسيد الزئبقيك .

          يذاب مسحوق الهيماتوكسيلين في الكحول ويضاف الشب المذاب مسبقا في الماء الحار ، يُغلى المزيجان ثم يضاف أوكسيد الزئبقيك حيث سيتحول لون المحلول إلى أرجواني غامق . يُبرد المحلول بسرعة تحت الماء العادي ثم يُرشح قبل الإستعمال ـ يوصى بإضافة حامض الخليك الثلجي إلى المحلول السابق بعد التبريد لتزيد من شدة الصبغ النووي .